一、黑色素细胞的胞内抑制

由于黑色素的形成主要发生在黑色素细胞内，对黑色素细胞内的黑色素形成机理的研究表明，黑色素的形成主要是由黑色素细胞内的四种酶：酪氨酸酶、多巴异构酶(TRp-2)、过氧化物酶、5，6-二翔基2梭酸即DHICA氧化酶(TRP-l)等酶单独或协同作用的结果而要实现皮肤的真正美白，对多种黑色素形成酶的抑制就显得至关重要。酪氨酸酶的抑制酪氨酸酶是一多酚氧化酶，属氧化还原酶类。

该酶主要催化两类不同的反应：(l)一元酚轻基化，生成邻二轻基化合物;(2)邻二酚氧化生成邻二苯醒。这两类反应中均有氧自由基参与反应。

依据抑制机理的不同，可将该类化合物分为两类。

(l)酪氨酸酶的破坏型抑制(即破坏酪氨酸酶的活性部位)。所谓酪氨酸酶的破坏型抑制，也就是寻求某种美白剂，使该美白剂直接对酪氨酸酶进行修饰、改性，使之失去对黑色素前体—酪氨酸的作用，从而达到抑制黑色素形成的目的。

(2)酪氨酸酶的非破坏型抑制。所谓酪氨酸酶的非破坏型抑制，即不对酪氨酸酶本身进行修饰、改性，而通过抑制酪氨酸酶的合成或取代酪氨酸酶的作用底物，从而达到抑制黑色素形成的目的。

依据美白剂作用机理的不同，可分为以下3种：

1、酪氨酸酶的合成抑制剂：胎盘提取物，关于其抑制机理，一种观点认为，该提取物可抑制酪氨酸酶的生物合成;另一观点认为，该提取物可加速黑色素细胞的角质化。尽管现在更倾向于其作为酪氨酸酶的合成抑制剂，但其抑制机理尚未最终确证;

2、酪氨酸酶糖营化作用抑制剂：葡萄糖胺、衣霉素等;

3、酪氨酸酶作用底物替代剂：由于在黑色素的生物合成中，酪氨酸是酪氨酸酶的作用底物，因此寻求与酪氨酸竞争的酪氨酸酶底物也可有效抑制黑色素的生成。

二、皮肤产品开发中的美白程序

成功的皮肤美白程序分三个时期：皮肤的美白前期护理;激活期，减轻皮肤的色调;保护期，长时间维持美白效果。

(一)前期护理

皮肤中的杂质会妨碍美白效果。表皮上层表面由死的皮肤细胞组成，妨碍活性物质的导入。美白程序第一期的目的在于改善皮肤的接收能力，须包括：除去死亡的细胞;除去皮肤表面的黑色素颗粒。前期护理应立刻见效，创造一种暂时性的环境使激活期能有一种温和的表现而不刺激皮肤。

(二)激活期

美白程序的第二期重点是清除在基底层的黑素颗粒，防止其进一步发展，它可通过几种途径起作用，具体如上所述胞内、胞外抑制。

(三)保护期

皮肤美白程序的保护期不仅要求广泛的防紫外线保护，而且还介入自由基清除剂。为维持活性物质的效果，重要的是要防止新的黑色素的形成，换句话说，确保增白过程不被紫外辐射的影响而逆转。维持期的目的是提供对抗有害阳光辐射的保护性屏障，使增白过程既安全又舒适。紫外线在皮肤上的照射诱发了三种重要的明显现象：氧化压力、炎症、DNA受损。

氧化压力导致己有的黑色素的变黑，加速DNA受损和引起发炎。由于在皮肤中使用了强抗氧化剂如维生素C和谷胧甘肤，强烈的晒黑会迅速恢复。

三、美肤产品开发中的有效成分选择实验

针对皮肤美白机理的各个阶段，复配选用去角质剂、黑色素抑制剂、抗炎及皮肤调理成分，全面改善肌肤状态，并从皮肤科学角度出发，调整皮肤使用条件，提高皮肤水分含量，使皮肤真正达到健康亮白的理想状态。采用酪氨酸酶活性抑制试验对美白剂进行初步筛选，酪氨酸酶活性试验操作简便快速、费用低，用量少，结果为客观的量化指标数据。通过本试验，优选出2-3种酪氨酸酶抑制效果显着的美白活性成分。

(1)材料和方法

721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)，电子分析天平(瑞士Meltter公司)，电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)，离心机(上海安亭科学仪器厂)，(L-酪氨酸(Sigma公司)，酪氨酸酶(51脚a公司)，磷酸氢二钠、磷酸二氢钠(北门化工厂)，Lumiskin(公司)，Phytolisht(美国安格公司)，p一熊果普(北京贝丽莱公司)，。一熊果营(瑞士潘得法公司)，AA2G(日本林原公司)，9410(科宁公司)，VCE(韩国)，VC-IP(日本林原公司)，MelarrestL(美国安格公司)。

(2)试验原理及方法

根据不同美白剂对酪氨酸酶活性的抑制程度，将酪氨酸酶加入酪氨酸溶液中，通过

分光光度计测定上述反应液加入不同种类不同浓度的美白剂于475nm处的OD值，来评价各种美白剂对酪氨酸酶的抑制效果。本试验反应在试管中进行，测定前，按表1准确吸取Al，A2，A3，A4组反应液，混匀，置于37℃水浴中恒温0.5小时，再加入0.5ml酪氨酸酶溶液再混匀，移至3ml比色皿中，于475lun处测定其吸光度(ID值)，计算样品对酪氨酸酶活性的抑制率(%)。酪氨酸酶活性抑制率按下列公式计算：I%=1-[(A3-A4)/(A1-A2)]X100%。

A1不加样品的吸光度值；

A2：不加样品和酪氨酸酶的吸光度值；

A3：加有样品的吸光度值；

A4：加样品，但不加酪氨酸酶的吸光度值。

(3)结果讨论